Bingo™先导编辑点突变平台
艾迪基因全新研发Bingo™先导编辑基因定点突变平台,可提供精准、高效的在细胞中进行基因点突变。Bingo™平台是基于目前最高效、最安全的先导编辑PE (Prime Editing) 基因定点突变技术,艾迪基因凝聚十多年基因编辑经验,在上千例基因编辑CRO项目经验中总结、优化、提升,成功率远超传统基因定点突变系统。
先导编辑技术原理
先导基因编辑 (Prime editing, PE) 是一种更高效、更精确的 CRISPR基因定点突变工具。与传统的CRISPR/Cas9基因编辑技术不同,先导编辑使用了一种新的Cas9酶——Cas9 nickase (Cas9n),它不会把DNA完全切断,只会剪切双链DNA中的一条链,这样细胞在修复DNA时,就不会发生引入随机突变的修复了。
先导基因编辑(PE)就是一个查找-替换的过程。设计一个两端分别携带gRNA 和基因编辑后模板序列的 pegRNA (prime editing guide RNA ,pegRNA),pegRNA含有特异的引物序列(类似sgRNA)和先导编辑蛋白,特异的引物序列可以定位到特异的位点,先导编辑蛋白是cas9 nickase(切DNA单链)和逆转录酶(RT)的融合蛋白。pegRNA的引物序列引导Cas9 nicknase切割DNA单链,逆转录酶依照未配对pegRNA序列合成新的DNA序列,原位合成新的编辑后序列替代原有序列的过程。
PE系统的组成包括先导编辑蛋白(Cas9 nickase、逆转录酶)和 pegRNA。Cas9 nickase是Cas9 H840A nickase,可以切割DNA单链;逆转录酶(reverse transcripase,RT)是M-MLV;融合后的蛋白可以提高基因编辑效率,被称作为PE1。通过引入逆转录酶RT的突变,提高模板链和引物结合位点的结合能力,进而提高没得活力和稳定性,可以讲PE的编辑效率提高2.3-5.1倍,这被称为PE2。
pegRNA一段包含逆转录模板的向导RNA和基因组序列互补的部分作为引物结合位点(Prime binding site, PBS),引物结合位点PBS和目标序列结合的位置作为逆转录的起始位点。
借助Cas9n、逆转录酶和特殊设计的gRNA(prime editing guide RNA ,pegRNA),先导编辑技术可以实现4种转换突变(C→T, G→A, A→G, T→C),和8种颠换突变(C→A, C→G, G→C, G→T, A→C, A→T, T→A, T→G),真正实现了精确性和泛用性共存的基因编辑。除了单个碱基的突变外,先导编辑还可以引入多至44bp的插入和多至80bp的敲除。欢迎联系我们的技术专家定制您的专属基因定点突变方案
服务流程
1. 设计一段带有转录模板(携带想要的基因信息)和必要Prime Binding Site(PBS)的 PE 编辑专用 gRNA——pegRNA。
2. Cas9切口酶在pegRNA上的sgRNA序列指引下,切割DNA单链,pegRNA 3′-端的PBS(引物结合序列)可以与切割断点前的互补序列识别配对
3. 逆转录酶(M-MLV RT)以pegRNA上PBS序列后的人工设计的模板序列为模板进行逆转录,将目标序列直接聚合到切口的DNA链上
4. 编辑后的DNA 双链延伸出一段额外新合成的 DNA Flap,启动细胞自有的3‘flap-5’flap equilibration 机制,将 DNA 原有的片段切除。
5.不匹配的DNA 双链通过错配修复(mismatch repair,MMR)机制,把非编辑链修复,整个编辑过程就完成了。
相关业务
● 基因定点突变细胞定制:独家专利优化PE系统,可实现阳性率>85%,比传统CRISPR/Cas9点突变更安全,不脱靶,更精准。
● 基因突变细胞系现货:全新推出的点突变癌症模型细胞现货库,覆盖目前最常见的癌症相关基因的定点突变,助力癌症基础研究和癌症诊断、治疗的研发。