怎么挑选Cas家族蛋白？本文让你轻松搞懂Cas13a、Cas12a/Cas12b、Cas14的区别！
CRISPR-Cas技术是近年来备受欢迎的基因编辑技术，现在CRISPR系统家族越来越壮大，越来越多的CRISPR-Cas蛋白被发现，例如：Cas9、Cas12a、Cas12b、Cas13a、Cas14等，那么怎么区分这几类酶呢？本文让你轻松区分这个Cas蛋白家族的成员！
01
Cas12a
Cas12a，又称Cpf1，在crRNA的引导下识别PAM位点TTN，进而对靶dsDNA进行切割。与Cas9不同的是，Cas12a无需RNA或其他蛋白辅助便可将pre-crRNA自我加工为成熟的crRNA，因此Cas12a无需tracrRNA即可实现靶位点的切割。
除此之外，Cas12a具有ssDNA非特异性切割活性，又称为反式切割活性。利用其活性，开发了基于DNA靶标的核酸检测系统：DETECTR。该平台将CRISPR/Cas体系与RPA恒温扩增技术结合，能够高效地进行多种病原微生物等检测。
Cas12a在检测DNA方面有着较高的灵敏性和实用价值，简单快速且无需大 型的仪器设备，但相较于其他CRISPR 检测系统而言，其不能用于单碱基差异检测，精度还有待提高。
除此之外，Cas12a具有ssDNA非特异性切割活性，又称为反式切割活性。利用其活性，开发了基于DNA靶标的核酸检测系统：DETECTR。该平台将CRISPR/Cas体系与RPA恒温扩增技术结合，能够高效地进行多种病原微生物等检测。
Cas12a在检测DNA方面有着较高的灵敏性和实用价值，简单快速且无需大 型的仪器设备，但相较于其他CRISPR 检测系统而言，其不能用于单碱基差异检测，精度还有待提高。
02
Cas12b
Cas12b，又称C2C1，在crRNA和tracrRNA引导下识别PAM位点TTN，切割靶标DNA。
利用其反式切割活性，开发了Cas12b介导的DNA检测平台：C Detection，与之前的Cas12a检测方法相比较，该检测具有更高的灵敏性，且在引入tgRNA之后，该系统可以区分单碱基的差异，弥补了Cas12a不能区分单碱基差异的缺点，为DNA检测提供了一个高效且高度实用的平台。
除此之外，利用Cas12b与等温扩增技术LAMP结合在一起，开发了HOLMESv2平台，该平台可用于一步法核酸检测和DNA甲基化定量。
利用其反式切割活性，开发了Cas12b介导的DNA检测平台：C Detection，与之前的Cas12a检测方法相比较，该检测具有更高的灵敏性，且在引入tgRNA之后，该系统可以区分单碱基的差异，弥补了Cas12a不能区分单碱基差异的缺点，为DNA检测提供了一个高效且高度实用的平台。
除此之外，利用Cas12b与等温扩增技术LAMP结合在一起，开发了HOLMESv2平台，该平台可用于一步法核酸检测和DNA甲基化定量。
03
Cas13a
Cas13a，又称C2C2，在crRNA引导下，识别并切割靶标ssRNA。与Cas12a类似，具有非特异性切割体系中的任意序列ssRNA的能力。
将Cas13a与RPA等温扩增技术结合，开发了Cas13a介导的RNA检测平台：SHERLOCK，该检测方法检测了寨卡病毒和登革热病毒，在肿瘤疾病检测方面也取得了理想的结果。
将Cas13a与RPA等温扩增技术结合，开发了Cas13a介导的RNA检测平台：SHERLOCK，该检测方法检测了寨卡病毒和登革热病毒，在肿瘤疾病检测方面也取得了理想的结果。
04
Cas14
Cas14是一种非常小的核酸酶，约为其他家族蛋白的一半。
Cas14a可以识别并切割靶标ssDNA，同样具有连带切割活性。可用于ssDNA的检测。Cas14可实现高保真SNP基因分型。
由于对DNA分子的识别不依赖PAM位点，Cas14对识别序列的准确性要求极其严格，单碱基的错配就会严重抑制其切割活力。
Cas14a可以识别并切割靶标ssDNA，同样具有连带切割活性。可用于ssDNA的检测。Cas14可实现高保真SNP基因分型。
由于对DNA分子的识别不依赖PAM位点，Cas14对识别序列的准确性要求极其严格，单碱基的错配就会严重抑制其切割活力。
05
总结
· 在检测双链DNA时，可优选Cas12a和Cas12b；
· 在检测RNA时可优选Cas13；
· 在检测单链DNA方面可优选Cas14。
将CRISPR/Cas体系与RPA恒温扩增技术结合建立的检测方法，具有高分辨率和高灵敏度、低成本、操作简单等优点，其在疾病诊断、环境评估、食品安全等领域有巨大的应用前景。
· 在检测RNA时可优选Cas13；
· 在检测单链DNA方面可优选Cas14。
将CRISPR/Cas体系与RPA恒温扩增技术结合建立的检测方法，具有高分辨率和高灵敏度、低成本、操作简单等优点，其在疾病诊断、环境评估、食品安全等领域有巨大的应用前景。
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