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CRISPR那些事儿
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FAQ
什么是KO细胞系？
KO细胞系（Knockout Cell Line）是通过基因编辑技术（如CRISPR-Cas9）敲除或删除特定基因的细胞系。这意味着目标基因被完全移除或失去功能，使研究人员能够观察该基因缺失对细胞行为和生物学过程的影响。这种细胞系在生物医学研究中非常重要，因为它们提供了直接了解基因功能和疾病机制的实验工具。
单质粒系统和双质粒系统文库载体的区别？
单质粒系统一次转染即可完成基因编辑，构建相对简单，但质粒较大并导致
感染效率偏低；双质粒系统中，使用使用两种载体分别装载Cas9或sgRNA表达盒。先构建Cas9稳转株，然后在Cas9稳转株的基础上转染sgRNA文库。有如下优点：
1）提高编辑效率：Cas9蛋白和sgRNA在不同的载体上独立、稳定表达，可以提高编辑效率。
2）灵活性：可以根据实验需要，灵活地进行载体设计和构建。比如一个载体装载两个sgRNA表达盒。
1）提高编辑效率：Cas9蛋白和sgRNA在不同的载体上独立、稳定表达，可以提高编辑效率。
2）灵活性：可以根据实验需要，灵活地进行载体设计和构建。比如一个载体装载两个sgRNA表达盒。
艾迪基因的单克隆筛选服务有哪些独特的优势？
艾迪基因采用行业顶级的3D单细胞打印技术，能够将单个细胞精确地分离和定位，可以大大提高单克隆筛选的成功率和工作效率。这项技术广泛应用于生物医药研发、抗体开发、药物筛选和治疗选择等领域，在细胞研究领域有着广泛的应用前景。
能否检测未知新基因？
目前玉米蛇无详细的参考基因组数据，艾迪基因目前只提供已知基因检测服务。
检测需要提供什么样品？
目前建议提供蜕化的蛇皮即可检测。
检测准确率如何？
依托艾迪基因实验室，采用双盲复核机制，第三方公司测序验证，准确率>99.9%。
什么是基因干扰？它如何工作？
基因干扰（Gene Knockdown）是通过小RNA分子（如siRNA、shRNA）或CRISPRi系统部分抑制目标基因表达的技术：
siRNA/shRNA：siRNA与细胞内的RISC复合体结合，降解靶标mRNA，阻断蛋白翻译。
CRISPRi：改造的dCas9蛋白结合gRNA后阻断基因启动子，抑制转录（不切割DNA）。
适用场景：基因功能研究、疾病机制解析、药物靶点验证。
我们主要提供哪些类型的基因干扰技术服务？（例如：siRNA转染、shRNA慢病毒/腺病毒、CRISPRi）
| 技术类型 | 适用场景 | 交付形式 |
|---|---|---|
| siRNA转染 | 快速验证（72-96小时效果） | 快速验证（干扰后细胞/实验报告） |
| shRNA病毒载体 | 长期抑制（稳定株筛选） | 病毒颗粒/稳转株细胞 |
| CRISPRi | 高特异性、抑制（i）基因 | dCas9细胞系+gRNA载体 |
siRNA、shRNA和CRISPR干扰（CRISPRi）有什么区别？我该如何选择？
| 参数 | siRNA | shRNA（病毒载体） | CRISPRi |
|---|---|---|---|
| 作用周期 | 瞬时（5-7天） | 长期（可稳定传代） | 长期稳定 |
| 细胞适用性 | 易转染细胞 | 广谱（包括难转染细胞） | 需要构建dCas9细胞系 |
| 脱靶风险 | 中-高 | 中 | 极低 |
| 用途 | 快速验证 | 动物/细胞模型 | 高精度调控 |
为什么选择艾迪基因点突变服务？
艾迪基因全新升级第七代Bingo™ Prime Editing (PE7），优化编辑蛋白和RNA编辑活性。对比第五代PE技术，点突变成功率和基因编辑效率显著提升，全球知名院校博士专家团队一对一服务。
什么是基因过表达？
基因过表达指的是通过各种技术手段使某个特定基因在细胞或生物体中表达水平显著高于正常水平。这通常是通过引入额外的基因拷贝或使用强启动子驱动基因表达来实现的。
诱导多能干细胞（iPSC）是什么？
诱导多能干细胞（iPSC）是一类通过将成体细胞重新编程为多能状态的细胞。它们具有类似于胚胎干细胞的特性，能够分化为体内的几乎所有细胞类型。这种技术允许科学家在体外生成各种细胞类型用于研究和治疗，而不需要使用胚胎干细胞。
KO细胞系与基因敲除动物模型有什么区别？
KO细胞系和基因敲除动物模型都用于研究基因功能，但它们各自有不同的应用场景和优势。KO细胞系在体外实验中使用，适用于高通量筛选和细胞水平的基因功能研究。基因敲除动物模型则在体内实验中使用，适用于研究基因在整个生物体中的功能及其与其他基因和环境的相互作用。
如何选择合适的细胞进行文库筛选？
细胞选择可以遵循以下原则：
1）与研究目的相符
2）sgRNA文库靶向的基因要与细胞的属源相符
3）细胞可以稳定传代
4）转染效率高
尽量不选用原代细胞。由于原代细胞无法稳定传代，可能在文库筛选实验的过程中，原代细胞已经出现大量死亡，无法完成实验。如果选用原代细胞进行文库筛选，为了解决上述的风险，可以通过降低细胞覆盖度和选择gRNA数较小的文库进行筛选，尽可能降低文库细胞池的数量和缩短实验周期。
1）与研究目的相符
2）sgRNA文库靶向的基因要与细胞的属源相符
3）细胞可以稳定传代
4）转染效率高
尽量不选用原代细胞。由于原代细胞无法稳定传代，可能在文库筛选实验的过程中，原代细胞已经出现大量死亡，无法完成实验。如果选用原代细胞进行文库筛选，为了解决上述的风险，可以通过降低细胞覆盖度和选择gRNA数较小的文库进行筛选，尽可能降低文库细胞池的数量和缩短实验周期。
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