报告基因细胞系
报告基因细胞系（Reporter Cell Lines）是一类通过引入特定报告基因，用于实时、定量反映细胞内信号变化和基因转录活性的功能性细胞模型。该类细胞系广泛应用于基因表达调控研究、信号通路解析、蛋白定位追踪、受体-配体相互作用分析以及高通量药物筛选与新药靶点验证等多个领域，是现代分子与细胞生物学研究中不可或缺的工具。
艾迪基因依托成熟的基因过表达实验体系和基因敲入技术平台，已构建多种成熟稳定的报告基因细胞系，覆盖多条经典信号通路和热门肿瘤治疗靶点基因，例如NF-κB、NFAT、GPCR、cAMP等通路，和EGFR、PIK3CA、KRAS等靶点基因。报告系统涵盖 GFP、RFP、荧光素酶（Luciferase）、HIBIT等多种报告基因或tag，以满足不同实验平台和研究方向的需求。
服务详情
| 细胞类型 | 各种细胞类型，包括肿瘤细胞系、正常体细胞系、干细胞和原代细胞等。 |
|---|---|
| 服务类型 | GFP、RFP、荧光素酶（Luciferase）、HIBIT等报告基因或tag |
| 交付标准 | 基因过表达多克隆细胞1株（2管细胞，1×10^6/管）/基因敲入单克隆细胞1株（2管细胞，1×10^6/管） |
| 周期/价格 |
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技术原理
敲入型报告基因细胞系依托HES-KI、Flash-KI等基因敲入技术平台，将报告基因精确插入至内源基因位点或其调控区域，使报告信号在内源表达背景下产生，能够更真实地反映生理状态下的基因调控与信号变化，适用于机制研究、精细功能分析及结果验证实验
成功案例
K562-EGFP 报告基因细胞系：基于HES-KI系统的AsCas12a介导的EGFP基因敲入
CHO-K1-EGFP 报告基因细胞系/293T-EGFP 报告基因细胞系：基于HES-KI系统的CRISPR/Cas9介导的EGFP基因敲入
慢病毒介导的copEGFP在A375细胞中的过表达
将CopEGFP基因序列克隆至慢病毒表达载体pLV3-CAG-MCS-P2A-Puro中，包装生产高滴度慢病毒颗粒，并感染人黑色素瘤细胞系A375。通过荧光显微镜直接观察感染后细胞中EGFP报告基因的表达情况，评估过表达效率。
注：本案例中使用的A375-copEGFP细胞为艾迪基因公司提供的现货细胞（货号：EDC01053），保障实验的快速开展与可重复性。copGFP过表达细胞现货库
图1：pLV3-CAG-MCS-P2A-Puro骨架载体图谱
图2：A375细胞明场图片
图3：A375-copEGFP细胞图片
基于Flash-KI系统在HEK293T细胞重要基因位点精确敲入EGFP
本案例采用艾迪基因研发的Flash-KI基因敲入技术平台，在HEK293T细胞GAPDH基因C端精准敲入EGFP报告基因。在未使用抗性筛选的条件下，多克隆细胞的敲入效率达到88%，与HES-KI系统相比，Flash-KI系统介导的重要基因敲入效率提高20%。
200-300倍的效率突破：基于Flash-KI系统，在A9细胞特定基因位点精确敲入效率从0.2%提升至46%。
本案例采用艾迪基因研发的Flash-KI基因敲入技术平台，在A19细胞T1R1基因C端精准敲入EGFP报告基因。在未使用抗性筛选条件下，常规CRISPR/HDR方法敲入效率仅为0.2%，这与在难编辑细胞系中常见的低于1%的效率一致。然而，使用Flash-KI敲入效率从0.2%提高到46%，整整230倍的提升。
Advantage and Characteristic
Optimazied Strategy
Optimazied Strategy
Optimazied Strategy
Optimazied Strategy
参考文献
基于CLASH技术的基因敲入策略
CLASH（Cas9-Linked Adaptor Synthesis for Homology-directed repair）技术能够在大规模细胞工程中实现高效的基因敲入。该方法结合了Cas9蛋白和适配子合成，使得在多种细胞类型中进行平行敲入成为可能。通过在DNA修复过程中提供特定的适配子来提高同源重组修复（HDR）的效率，从而大大提升基因敲入的成功率。该技术展示了在细胞工程和基因编辑中的巨大潜力，特别是在需要多基因修改的复杂生物工程应用中。
通过同步细胞周期来增强CRISPR介导的同源重组修复（HDR）效率
该研究探讨了通过同步细胞周期来增强CRISPR介导的同源重组修复（HDR）效率的方法。使用小分子调节细胞周期，在各种细胞系中实现了1.2-1.5倍的KI效率提高。研究还展示了该方法在动物胚胎中的应用，显著提高了猪胚胎中的KI频率。这一方法通过调节细胞进入有利于HDR的周期阶段，从而提高了基因敲入的成功率，为CRISPR基因编辑提供了新的优化策略。
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