高效定点整合平台
高效定点整合平台(FLASH-KI):精准写入,高效可达
核心技术一:FLASH-KI递送系统
传统敲入策略通常需要分别递送Cas9蛋白、sgRNA与Donor模板,步骤繁琐且效率受限。艾迪基因研发的FLASH-KI递送载体,实现了RNP复合物与Donor DNA的同时递送,大幅简化操作流程,提升协同效率。
核心技术二:NHEJ抑制剂——KI enhancer drug
在CRISPR介导的DNA双链断裂修复中,NHEJ(非同源末端连接)是主要修复途径,而HDR(同源定向修复)效率通常不足10%。艾迪基因自主研发了NHEJ抑制药物,在编辑过程中短暂、可逆地抑制NHEJ关键蛋白,迫使细胞优先选择HDR途径进行修复。
服务优势:
FLASH-KI vs. 传统方法
| 技术指标 | 传统HDR(质粒/电转) | 传统电转(仅Donor) | FLASH-KI(+NHEJ抑制) | 提升数倍 |
| 293T GAPDH敲入效率 | 约10-15% | 68% | 88% |
1.3倍(vs电转) |
| A9 T1R1敲入效率 | <5% | 约10-15% | 46% | 3-9倍 |
| hESC TH敲入效率 | <3% | 约5% | 20% | 4-6倍 |
| 无需药物筛选即可获得高纯度池 | 否 | 否 | 是(多个靶点已验证) | / |
| 细胞活力 | 60-70% | 50-60% | >90% | 显著提升 |
不同细胞类型/难度级别下的预期表现(FLASH-KI平台)
| 细胞难度级别 | 代表细胞系 | 预期敲入效率范围 | 项目成功率(获得纯合单克隆) | 交付周期(从启动到交付) | 关键影响因素 |
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⭐低难度(常规永生化细胞系)
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HEK293、HeLa、CHO、HCT-116 | 60-90% | >90% | 8-10 周 | 靶点位点、Donor设计质量 |
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⭐⭐中难度(难转染细胞系、部分悬浮细胞)
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A9、THP-1、K562、urkat | 30-60% | 70-80% | 10-12 周 | 细胞状态、转染参数、NHEJ抑制药物浓度 |
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⭐⭐⭐高难度(干细胞、原代细胞、类器官)
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iPSC、hESC、原代T细胞、类器官 | 15-30% | 60-70% | 12-14 周 | 细胞健康度、单克隆形成效率 |
标准型KI:单克隆细胞系 + 测序验证。
高纯度细胞池(pool):对于易转染细胞、GAPDH、ACTB等看家基因,直接交付80%以上阳性率的细胞池,省去单克隆筛选时间。
难转染细胞定制:针对hESC、iPSC、原代细胞专属优化方案,确保获得背景单一阳性单克隆细胞。

- 截至2026年第一季度,FLASH-KI技术平台已完成20+个商业项目交付,覆盖永生化细胞、肿瘤细胞、干细胞等多种类细胞系,实现插入片段长度0.5-5.5kb的精准整合,整体项目成功率98.6%,其中5500bp以下片段敲入成功率达100%。
案例一:高丰度表达基因精准敲入(HEK293T-GAPDH-EGFP)
技术对比:传统电转法阳性率仅68%且伴随30%细胞死亡;采用FLASH-KI递送系统实现:①无需抗生素筛选,阳性率提升至88%;②活细胞率保持95%以上;③荧光信号强度均一性提高40%。
项目周期:4周交付88%阳性率的多克隆细胞池;8周获得纯合敲入单克隆细胞系,较行业平均周期缩短30%。

案例二:随机靶点基因完整敲入(A-9-T1R1-CoGFP-Puro)
技术突破:采用FLASH-KI递送系统实现:①无筛选标记情况下阳性率达46%;②活细胞率保持95%以上;③单克隆细胞系稳定性超过15代。
项目周期:5周获得功能性多克隆细胞系;9周完成单克隆筛选与验证。

案例三:人胚胎干细胞基因编辑(hESC-H9-TH-P2A-EGFP)
技术优势:针对难转染干细胞的技术突破:①无药物筛选阳性率达20%(行业平均<5%);②细胞活率保持90%以上;③Oct4/Sox2多能性标志物表达正常。
项目周期:5周获得20%阳性率多克隆细胞;11周完成单克隆鉴定。
