Flash-KI 高效定点整合平台
高效定点整合平台（FLASH-KI）：精准写入，高效可达
基因敲入（Knock-in, KI）是实现内源基因荧光标记、报告基因插入或点突变修饰的关键技术，广泛应用于蛋白动态示踪、细胞系开发、疾病模型构建及药物筛选等领域。然而，传统KI方法依赖同源定向修复（HDR），在大多数细胞中效率极低、细胞损伤大、筛选周期漫长，成为细胞模型构建的核心瓶颈。
为解决这一痛点，艾迪基因基于FLASH-KI技术平台，整合了高效递送系统与细胞修复通路调控两大核心技术。通过将精准编辑元件与瞬时效率增益方案相结合，实现了在多种难转染细胞（如hESC、iPS）及复杂基因座上的高效、低毒、无需药物筛选的精准敲入。
服务优势
传统敲入策略通常需要分别递送Cas9蛋白、sgRNA与Donor模板，步骤繁琐且效率受限。艾迪基因研发的FLASH-KI递送载体，实现了RNP复合物与Donor DNA的同时递送，大幅简化操作流程，提升协同效率。
共递送设计
低细胞毒性
广谱适用
无需药物筛选
在CRISPR介导的DNA双链断裂修复中，NHEJ（非同源末端连接）是主要修复途径，而HDR（同源定向修复）效率通常不足10%。艾迪基因自主研发了NHEJ抑制药物，在编辑过程中短暂、可逆地抑制NHEJ关键蛋白，迫使细胞优先选择HDR途径进行修复。
显著提升敲入效率
可逆抑制
无需基因改造
兼容多种递送方式
| 技术指标 | 传统HDR（质粒/电转） | 传统电转（仅Donor） | FLASH-KI（+NHEJ抑制） | 提升数倍 |
|---|---|---|---|---|
| 293T GAPDH敲入效率 | 约10-15% | 68% | 88% | 1.3倍（vs电转） 5-8倍（vs传统HDR） |
| A9 T1R1敲入效率 | ＜5% | 约10-15% | 46% | 3-9倍 |
| hESC TH敲入效率 | ＜3% | 约5% | 20% | 4-6倍 |
| 无需药物筛选即可获得高纯度池 | 否 | 否 | 是（多个靶点已验证） | / |
| 细胞活力 | 60-70% | 50-60% | ＞90% | 显著提升 |
| 细胞难度级别 | 代表细胞系 | 预期敲入效率范围 | 项目成功率（获得纯合单克隆） | 交付周期（从启动到交付） | 关键影响因素 |
|---|---|---|---|---|---|
| ⭐低难度（常规永生化细胞系） | HEK293、HeLa、CHO、HCT-116 | 60-90% | >90% | 8-10 周 | 靶点位点、Donor设计质量 |
| ⭐⭐中难度（难转染细胞系、部分悬浮细胞） | A9、THP-1、K562、Jurkat | 30-60% | 70-80% | 10-12 周 | 细胞状态、转染参数、NHEJ抑制药物浓度 |
| ⭐⭐⭐高难度（干细胞、原代细胞、类器官） | iPSC、hESC、原代T细胞、类器官 | 15-30% | 60-70% | 12-14 周 | 细胞健康度、单克隆形成效率 |
• Pool效率：指转染后未进行单克隆筛选的细胞群体中，正确敲入细胞的比例（通过流式或测序检测）。
• 项目成功率：指最终能够交付至少1株纯合单克隆细胞系的项目比例。
• 以上数据基于公司内部已完成的100+敲入项目统计。
服务类型
标准型KI
高纯度细胞池（pool）
难转染细胞定制
技术流程
技术应用案例
截至2026年第一季度，FLASH-KI技术平台已完成20+个商业项目交付，覆盖永生化细胞、肿瘤细胞、干细胞等多种类细胞系，实现插入片段长度0.5-5.5kb的精准整合，整体项目成功率98.6%，其中5500bp以下片段敲入成功率达100%。
在HEK293T细胞系GAPDH基因C端插入EGFP荧光标签（841 bp），用于活细胞动态示踪研究，要求无药物筛选压力下获得高纯度阳性细胞群。
传统电转法阳性率仅68%且伴随30%细胞死亡；采用FLASH-KI递送系统实现：①无需抗生素筛选，阳性率提升至88%；②活细胞率保持95%以上；③荧光信号强度均一性提高40%。
4周交付88%阳性率的多克隆细胞池；8周获得纯合敲入单克隆细胞系，较行业平均周期缩短30%。
在A-9细胞系T1R1基因位点插入EF1a-CoGFP-T2A-Puro表达框（2115 bp），要求保持受体蛋白天然构象与信号通路完整性。
采用FLASH-KI递送系统实现：①无筛选标记情况下阳性率达46%；②活细胞率保持95%以上；③单克隆细胞系稳定性超过15代。
5周获得功能性多克隆细胞系；9周完成单克隆筛选与验证。
在hESC-H9细胞系TH基因C端插入P2A-NeoR-EF1a-EGFP表达框（2283 bp），要求维持干细胞多能性与分化潜能。
针对难转染干细胞的技术突破：①无药物筛选阳性率达20%（行业平均＜5%）；②细胞活率保持90%以上；③Oct4/Sox2多能性标志物表达正常。
5周获得20%阳性率多克隆细胞；11周完成单克隆鉴定。
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