Flash-KO 技术平台
基因敲除细胞系构建技术平台——高效、精准、稳定
艾迪基因可为科研及工业客户提供专业基因敲除细胞系构建服务，依托优化 CRISPR 编辑技术、多元递送方案与高精度筛选体系，攻克原代细胞、干细胞、类器官等难转染细胞的编辑难题。
基因编辑的核心瓶颈在于高效低毒的细胞递送。公司自研FLASH 广谱基因编辑递送平台，通过蛋白 / 核酸共递送载体，实现 RNP 复合物高效递送，兼顾低毒性与高编辑效率；搭配全流程标准化服务，保障交付细胞系遗传背景均一。
目前 FLASH 系统已适配 400 + 细胞系，成功构建了超过4500种基因敲除细胞模型，这些模型已被制药公司和研究机构广泛应用于功能基因组学、遗传疾病机制研究、药物靶点验证以及合成生物学工程等领域。
1) 广谱高效：已成功覆盖400余种细胞系，53%的细胞系通过基因组测检测到敲除效率突破80%，尤其擅长iPSC、hESC、类器官及免疫细胞等传统技术难以转染的细胞类型；
2) 已验证的全基因组sgRNA：结合数千例项目经验，独创sgRNA设计逻辑，具有经过实验验证的全基因组sgRNA；
3) 细胞筛选无忧：采用德国cytena公司顶级3D细胞打印系统UP.SIGHT，高效挑选阳性单克隆；
4) 极低细胞毒性：采用创新蛋白递送系统，彻底规避DNA质粒导致的免疫原性反应与随机整合风险，转染后24-48h细胞存活率保持在90%以上；
5) 周期缩短：FLASH-KO技术无需进行抗性筛选，极限周期缩短至5周。
| 对比维度 | FLASH-KO (RNP递送) | 慢病毒/AAV | 电转 | 脂质体转染 |
|---|---|---|---|---|
| 核心原理 | 递送预组装的Cas9蛋白+sgRNA复合物(RNP) | 病毒介导，将CRISPR组分整合至宿主基因组 | 高压电脉冲使细胞膜穿孔，导入RNP或DNA | 脂质体包裹核酸，通过膜融合或内吞进入细胞 |
| 编辑效率 | 极高 53%细胞系敲除效率>80% 88%细胞系敲除效率>30% |
中等 稳定表达Cas9可提高效率 |
中等偏高 敲除30-70% |
中等偏低 敲除30-70% 敲入<10% |
| 细胞毒性 | 极低 转染后细胞活力>90% |
中等 随机整合有致突变风险 |
高 电穿孔死亡率可达30-50% |
中等 对部分细胞毒性较大 |
| 实验周期 | 短 即用型，无需病毒包装 最快5周获得纯合克隆 |
长 慢病毒包装需2-3周 AAV生产更久 |
短 数小时完成递送 |
短 数小时完成递送 |
| 适用细胞范围 | 极广 已验证400+细胞系 擅长iPSC、类器官、免疫细胞等 |
受限 AAV容量小(SpCas9装不下) 原代T细胞效率低 |
普遍适用 对神经元等效率低 参数需优化 |
受限 干细胞/悬浮细胞效率极低 非所有细胞适用 |
| 安全风险 | 极低 无外源DNA整合 无整合风险 |
高 随机整合至宿主基因组 |
极低 瞬时表达，无整合风险 |
低 瞬时表达，无整合风险 |
服务类型
1) 单基因敲除
2) 多基因敲除
3) 片段敲除
案例一：部分细胞系高效敲除数据展示
为验证FLASH系统的广谱适用性与高效性，我们选取了近百株不同组织来源、不同物种的细胞系进行基因敲除测试，涵盖肿瘤细胞、正常永生化细胞、干细胞、免疫细胞、类器官等类型。结果显示：
✓ 53% 的细胞系敲除效率 >80%
✓ 88% 的细胞系敲除效率 >30%
✓ 即使在iPSC、hESC、原代T细胞、类器官等传统难转染细胞中，敲除效率也显著优于传统方法。
案例二：iPSC (CIITA、B2M) 双基因敲除
➢ 挑战：iPSC难转染，传统方法效率<5%
➢ 方案：采用FLASH共递送两个sgRNA
➢ 成果：CIITA基因编辑效率达到81%，B2M基因靶点效率达到71%，8周获得纯合双敲除单克隆株，多能性未受影响。
案例三：Huh6细胞基因片段敲除
➢ 挑战：精确删除较大基因组区域（通常为几百到几千个碱基对），移除基因的关键外显子或功能域。
➢ 方案：采用FLASH-KO共递送多条sgRNA，实现精确删除
➢ 成果：仅用8周，成功在Huh6细胞中实现精确小片段敲除。
案例四：基于Flash-KO平台构建在IPSC细胞中三基因共敲除细胞模型
本案例基于艾迪基因Flash-KO 基因敲除平台 ，将RNP直接导入人诱导多能干细胞(iPSC)，实现3个基因的同步敲除，每个基因的敲除效率均达到50%以上。
实验数据统计分析
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