单细胞基因编辑技术平台
技术平台介绍
单细胞基因编辑技术平台：基因敲除克隆一步到位，极致高效
传统基因编辑细胞系构建流程通常需要经历多克隆池筛选→阳性单克隆筛选→单克隆扩增的漫长过程，周期长达10-14周，且多克隆筛选阶段可能存在优势克隆偏移，影响最终细胞系的代表性。
艾迪基因突破性地开发了单细胞基因编辑技术平台，将单细胞铺板、单细胞培养与基因编辑深度融合。通过德国Cytena UP.SIGHT系统将单个细胞精准铺板至96孔板，结合自研CFM促克隆药物显著提升单细胞克隆形成效率，再搭配Flash-KO方法在单细胞水平实现基因敲除，一步获得单细胞来源的基因编辑细胞系，彻底跳过传统多克隆筛选环节，周期缩短至6-8周。
核心技术优势
UP.SIGHT单细胞铺板：
德国Cytena顶级的3D细胞打印系统，单细胞铺板准确率>99%，确保单克隆源性；
CFM促克隆药物：
自研药物，促进单细胞贴壁与生长，显著提高克隆形成效率；
自研药物，促进单细胞贴壁与生长，显著提高克隆形成效率；
FLASH递送方法：
在单细胞水平直接进行基因编辑，无需等待细胞扩增，一步获得编辑成功的单克隆，纯合单克隆敲除成功率60-80%。
在单细胞水平直接进行基因编辑，无需等待细胞扩增，一步获得编辑成功的单克隆，纯合单克隆敲除成功率60-80%。
周期短：
彻底跳过传统多克隆筛选环节，周期缩短至6-8周，较常规方法缩短30%。
彻底跳过传统多克隆筛选环节，周期缩短至6-8周，较常规方法缩短30%。
单细胞基因编辑 vs. 传统流程：全面领先
| 对比维度 | 传统有限稀释法 | 电转/病毒转染+筛选 | 单细胞基因编辑平台 |
| 单克隆获取方式 | 人工有限稀释，随机性强，易出现多克隆混合 | 多克隆池筛选后有限稀释，步骤繁琐 | UP.SIGHT精准铺板，单细胞准确率>99% |
| 是否需多轮筛选 | 是（2-3轮） | 是（抗性筛选+有限稀释） | 否：一步获得单克隆 |
| 周期 | 12-20周 | 14-18周 | 8-10周（缩短30%） |
| 单克隆形成效率 | 10-30%（依赖细胞系） | 10-30% | 31-62%（293T达62.5%，HeLa 31.25%） |
| 单克隆敲除成功率 | 30-50% | 40-60% | 60-100%（HeLa 100%，293T 80%） |
| 细胞损伤 | 低（但多次传代） | 高（电转、筛选损伤） | 低（原位转染，无需消化） |
| 自动化程度 | 人工操作，批间差异大 | 半自动 | 全自动（UP.SIGHT图像识别+分配） |
| 适用细胞类型 | 常规贴壁细胞 | 较广 | 广，覆盖贴壁细胞+悬浮细胞 |
服务类型
相关服务
| 服务类型 | 技术方案 | 适用场景 | 交付内容 | 周期 |
| 单基因敲除（标准） | UP.SIGHT铺板 + CFM促克隆 + FLASH-RNP | 常规贴壁/悬浮细胞系单基因敲除 | 纯合单克隆细胞系（≥2株）+ 测序报告 + 克隆图像 | 8-10周 |
| 多基因共敲除 | 同时递送多个sgRNA，单细胞铺板筛选 | 双基因/三基因联合敲除（如免疫检查点组合） | 纯合多敲单克隆细胞系 + 验证报告 | 10-12周 |
| 高通量阵列式敲除 | 96孔板预设计sgRNA文库 + 自动化铺板与转染 | 全基因组筛选、药物靶点筛选、信号通路解析 | 每孔单克隆细胞系（可选pool或克隆） | 12-16周 |
| 点突变（定制） | 单细胞铺板 + FLASH-PE7先导编辑 | 单碱基替换、小片段插入/删除（如疾病点突变模型） | 纯合点突变单克隆细胞系 + 测序报告 | 12-16周 |
| 基因敲入（定制） | 单细胞铺板 + FLASH-KI（RNP+Donor）+ NHEJ抑制 | 报告基因敲入、标签插入、条件性等位基因 | 纯合敲入单克隆细胞系 + 测序/流式报告 | 12-16周 |
成功案例
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293T B2M基因敲除——高效获得48个纯合单克隆
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目标：在293T细胞中构建B2M基因敲除细胞系方案：UP.SIGHT单细胞铺板 → CFM促克隆培养 → FLASH-KO方法转染结果：96孔板中克隆形成效率62.5%，获得纯合敲除单克隆成功率为80%，项目周期缩短2-3周。
A549、HeLa B2M基因敲除——100%敲除成功率
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目标：在A549和HeLa细胞系中构建B2M基因敲除细胞系方案：UP.SIGHT单细胞铺板 → CFM促克隆培养 → FLASH-KO方法转染结果：96孔板中形成38、65个克隆，获得纯合敲除单克隆成功率为成功率100%，无需额外筛选，一步获得高质量细胞系。
HAP1 96个不同基因敲除——高通量验证
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目标：在HAP1细胞中同时构建96个不同基因的敲除细胞系方案：96孔板单细胞铺板 → 针对不同基因的 FLASH-KO方法转染结果：96孔中克隆形成70个（形成效率72.9%）；纯合敲除单克隆42个（成功率60%）；证明平台在高通量基因编辑中的可靠性。
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