产品原理
本试剂盒是基于一种新型核酸恒温扩增技术:重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),可以在37~42 ℃条件下,10~30 min内实现待测靶标的快速扩增。引物与重组酶形成复合物,首先在双链DNA中寻找同源序列,然后通过重组酶的链置换活性将引物插入同源位点,在单链结合蛋白作用下置换DNA链。接着重组酶被分解,引物的3'末端被链置换并与聚合酶结合。最后模板链分开,继续延长新的DNA链,形成两条新的dsDNA。
在扩增体系中,添加了针对检测模板而设计的荧光分子探针。该探针结合至检测模板,随着反应体系的每一轮扩增而释放并放大荧光信号,使用荧光监测设备能实时监控目标片段的扩增过程。
产品特点及优势
1. 检测结果准确:灵敏度高(可达1 copies/ml);特异性强。
2. 操作简单:配液步骤少;引物探针设计简单。
3. 反应时间短:仅需30min。
4. 可实时监测:通过添加模板特异设计的分子探针,并使用荧光监测设备,可实时监控目标核酸片段的扩增过程。
应用方向
试剂盒组分
组成 | 含量 |
A buffer | 1.6 mL×1 管 |
B buffer | 150 μL×1 管 |
正对照模板 | 30 μL×1 管 |
Positive control primer-探针 mix | 70 μL×1 管 |
试剂 | 48 份 |
使用说明书 | 1 份 |
反应条件
恒温39 ºC;每30 s采集一次FAM通道(信号采集通道的选择与荧光探针设计一致)荧光值;反应时间20 min。
体系配制
组分 | 体积 (μL) |
A buffer | 29.4 |
上游引物 (10 μM) | 2 |
下游引物 (10 μM) | 2 |
探针 (10 μM) | 0.6 |
ddH2O 和 DNA 模板 | 13.5 |
B buffer | 2.5 |
总体积 | 50 |
储存条件
1.运输温度:≤ 20 ºC的恒温环境;
2.储存条件:储存温度 ≤ -20 °C(± 5 °C)恒温环境,避光保存,避免重压、反复冻融;
3.产品有效期:14个月;
4.生产日期见外包装。