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CRISPR那些事儿
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FAQ
如何选择合适的基因递送方式？
选择适合的基因传递系统需要根据具体实验条件、研究目的以及细胞类型等因素综合评估。定量比较各种系统的传递效率、细胞毒性和稳定性等是进一步明确选择的重要步骤。
病毒递送系统适用于需要高递送效率、基因持续表达的试验，细胞可承受较高的细胞毒性和免疫反应；如果需要较低的细胞毒性和免疫反应，并且操作简便、成本低，则选择脂质体基因传递系统。如果需要高递送效率、递送大片段DNA，且能接受较高的操作难度，基因枪基因递送系统是一个可选的方法。假如需要高递送效率，操作相对简单，且无需特殊设备，电穿孔递送系统可能是一个适合的选择。
病毒递送系统适用于需要高递送效率、基因持续表达的试验，细胞可承受较高的细胞毒性和免疫反应；如果需要较低的细胞毒性和免疫反应，并且操作简便、成本低，则选择脂质体基因传递系统。如果需要高递送效率、递送大片段DNA，且能接受较高的操作难度，基因枪基因递送系统是一个可选的方法。假如需要高递送效率，操作相对简单，且无需特殊设备，电穿孔递送系统可能是一个适合的选择。
为什么研究人员要使用KO细胞系？
研究人员使用KO细胞系来解析基因功能，因为敲除基因能够揭示该基因在细胞生长、分化、代谢、信号传导等过程中的具体作用。通过比较敲除基因的细胞与正常细胞的差异，科学家可以深入了解基因在疾病中的作用，进而开发新的治疗方法。例如，KO细胞系在癌症、遗传病和神经退行性疾病的研究中具有重要应用。
如何选择合适的细胞进行文库筛选？
细胞选择可以遵循以下原则：
1）与研究目的相符
2）sgRNA文库靶向的基因要与细胞的属源相符
3）细胞可以稳定传代
4）转染效率高
尽量不选用原代细胞。由于原代细胞无法稳定传代，可能在文库筛选实验的过程中，原代细胞已经出现大量死亡，无法完成实验。如果选用原代细胞进行文库筛选，为了解决上述的风险，可以通过降低细胞覆盖度和选择gRNA数较小的文库进行筛选，尽可能降低文库细胞池的数量和缩短实验周期。
1）与研究目的相符
2）sgRNA文库靶向的基因要与细胞的属源相符
3）细胞可以稳定传代
4）转染效率高
尽量不选用原代细胞。由于原代细胞无法稳定传代，可能在文库筛选实验的过程中，原代细胞已经出现大量死亡，无法完成实验。如果选用原代细胞进行文库筛选，为了解决上述的风险，可以通过降低细胞覆盖度和选择gRNA数较小的文库进行筛选，尽可能降低文库细胞池的数量和缩短实验周期。
什么是单克隆筛选，为什么它在基因编辑研究中如此重要？
单克隆筛选是从混合细胞池中分选出单个克隆，并由该克隆培养扩增成细胞系。单克隆筛选保证了使用的细胞系是来源于同一个细胞，并且确保了遗传背景的高度一致。在细胞被基因编辑或基因修饰后，初始细胞池的每个细胞的遗传背景的差异是巨大的，这样的细胞池用于后续的实验，实验结果无疑是不准确的。通过单克隆筛选，可以获得遗传背景一致、具有稳定基因编辑的细胞群体，监测到的表型变化才是稳定准确的。
如何选择合适的基因递送方式？
选择适合的基因传递系统需要根据具体实验条件、研究目的以及细胞类型等因素综合评估。定量比较各种系统的传递效率、细胞毒性和稳定性等是进一步明确选择的重要步骤。
病毒递送系统适用于需要高递送效率、基因持续表达的试验，细胞可承受较高的细胞毒性和免疫反应；如果需要较低的细胞毒性和免疫反应，并且操作简便、成本低，则选择脂质体基因传递系统。如果需要高递送效率、递送大片段DNA，且能接受较高的操作难度，基因枪基因递送系统是一个可选的方法。假如需要高递送效率，操作相对简单，且无需特殊设备，电穿孔递送系统可能是一个适合的选择。
病毒递送系统适用于需要高递送效率、基因持续表达的试验，细胞可承受较高的细胞毒性和免疫反应；如果需要较低的细胞毒性和免疫反应，并且操作简便、成本低，则选择脂质体基因传递系统。如果需要高递送效率、递送大片段DNA，且能接受较高的操作难度，基因枪基因递送系统是一个可选的方法。假如需要高递送效率，操作相对简单，且无需特殊设备，电穿孔递送系统可能是一个适合的选择。
检测准确率如何？
依托艾迪基因实验室，采用双盲复核机制，第三方公司测序验证，准确率>99.9%。
能否检测未知新基因？
目前玉米蛇无详细的参考基因组数据，艾迪基因目前只提供已知基因检测服务。
检测需要提供什么样品？
目前建议提供蜕化的蛇皮即可检测。
什么是基因干扰？它如何工作？
基因干扰（Gene Knockdown）是通过小RNA分子（如siRNA、shRNA）或CRISPRi系统部分抑制目标基因表达的技术：
siRNA/shRNA：siRNA与细胞内的RISC复合体结合，降解靶标mRNA，阻断蛋白翻译。
CRISPRi：改造的dCas9蛋白结合gRNA后阻断基因启动子，抑制转录（不切割DNA）。
适用场景：基因功能研究、疾病机制解析、药物靶点验证。
我们主要提供哪些类型的基因干扰技术服务？（例如：siRNA转染、shRNA慢病毒/腺病毒、CRISPRi）
| 技术类型 | 适用场景 | 交付形式 |
|---|---|---|
| siRNA转染 | 快速验证（72-96小时效果） | 快速验证（干扰后细胞/实验报告） |
| shRNA病毒载体 | 长期抑制（稳定株筛选） | 病毒颗粒/稳转株细胞 |
| CRISPRi | 高特异性、抑制（i）基因 | dCas9细胞系+gRNA载体 |
siRNA、shRNA和CRISPR干扰（CRISPRi）有什么区别？我该如何选择？
| 参数 | siRNA | shRNA（病毒载体） | CRISPRi |
|---|---|---|---|
| 作用周期 | 瞬时（5-7天） | 长期（可稳定传代） | 长期稳定 |
| 细胞适用性 | 易转染细胞 | 广谱（包括难转染细胞） | 需要构建dCas9细胞系 |
| 脱靶风险 | 中-高 | 中 | 极低 |
| 用途 | 快速验证 | 动物/细胞模型 | 高精度调控 |
艾迪基因的Bingo™ Prime Editing 7(PE7)平台如何保证点突变的成功率？
艾迪基因的Bingo™ Prime Editing 7(PE7)平台基于超过十年的基因编辑经验，结合成千上万个基因编辑CRO项目的总结、优化和提升，具有远超传统基因位点特异性突变系统的成功率。Bingo™ Prime平台采用高效的逆转录酶和精准的先导RNA设计，确保每一次点突变都能达到预期效果。
为什么要进行基因过表达？
基因过表达可以帮助研究特定基因的功能，揭示其在生物体内的作用机制。它也常用于药物筛选、疫苗开发和蛋白质生产等场景中。例如，通过过表达某个治疗蛋白，可以研究其在疾病模型中的治疗效果。
在临床应用中，iPSCs的潜在应用有哪些？
iPSC在临床中具有广泛的应用潜力，包括用于细胞治疗（如治疗糖尿病或心脏病）、组织工程（如开发人工皮肤或肝脏组织）、以及个性化药物筛选（如根据患者特定的细胞反应来选择最佳治疗方案）。这些应用方向可能会改变治疗的方式，提供更有效和个性化的医疗服务。
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