产品原理
本试剂盒是基于一种新型核酸恒温扩增技术:重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),可以在42 ℃条件下,10~30 min内实现待测靶标的快速扩增。首先,利用特异性引物将RNA转换成cDNA。然后,利用RPA技术对cDNA进行恒温扩增。RPA技术依赖于三种主要成分:重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶,在这些酶共同作用和恒温条件下对cDNA模板进行快速扩增。
在扩增体系中,添加了针对检测模板而设计的荧光分子探针。该探针结合至检测模板,随着反应体系的每一轮扩增而释放并放大荧光信号,使用荧光监测设备能实时监控目标片段的扩增过程。
产品优势及特点
1. 检测结果准确:灵敏度高;特异性强。
2. 反应时间短:仅需30min。
3. 对设备要求低:金属浴、水浴锅等即可进行检测。
4. 可实时监测:加入根据模板设计的特异的分子探针,使用荧光监测设备能实现对目标片段扩增过程的实时监控。
应用方向
试剂盒组分
组成 | 含量 |
A buffer | 1.6 mL×1 管 |
B buffer | 150 μL×1 管 |
试剂 | 48 份 |
使用说明书 | 1 份 |
体系配制
组分 | 体积 (μL) |
A buffer | 29.4 |
上游引物 (10 μM) | 2 |
下游引物 (10 μM) | 2 |
探针 (10 μM) | 0.6 |
ddH2O and RNA 模板 | 13.5 |
B buffer | 2.5 |
总体积 | 50 |
反应条件
恒温42 ºC;每30 s采集一次FAM通道(信号采集通道的选择与荧光探针设计一致)荧光值;反应时间20 min。
储存条件
1.运输温度:≤ 20 ºC的恒温环境;
2.储存条件:储存温度 ≤ -20 °C(± 5 °C)恒温环境,避光保存,避免重压、反复冻融;
3.产品有效期:14个月;
4.生产日期见外包装。